流行性感冒（简称流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒属正粘病毒科，根据NP蛋白和M蛋白的不同流感病毒可分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三种类型；根据HA和NA的不同甲型流感病毒又可分为不同的亚型，其中HA可分为15个亚型，NA可分为9个亚型。同其他病毒性疾病一样，流感的防治尚无特别有效的方法，接种流感疫苗被认为是预防流感发生与传播的最佳方法。从1933年Smith等首次从雪貂体内分离到流感病毒以来，人们就一直在进行流感疫苗的研究。下面就流感疫苗的研究进展作一介绍。
1．正在应用的流感疫苗
    流感病毒灭活疫苗是目前注册的唯一人用流感疫亩，目前用于免疫人群的疫苗主要是针对甲型流感病毒H1N1亚型。H3N3亚型以及乙型流感病毒的三联灭活疫苗。包括括以下几种。
l．l流感全病毒灭活疫苗：流感病毒接种于9－10日龄鸡胚尿囊腔中，l－2 d后冷胚收获尿囊液，用福尔马林处理，灭活试验和无菌试验合格后，采用超速离心或柱层析方法对尿囊液进行浓缩和纯化，得到病毒原液，各项检验合格后进行分包装，获得流感全病毒灭活疫苗。流感全病毒灭活疫苗具有较高的免疫原性和相对较低的生产成本，但是在接种过程中副反应发生率也较高，同时不得应用于6岁以下儿童。这些都限制了流感全病毒疫苗的应用。

1.2裂解型流感灭活疫苗：裂解型流感灭恬疫苗是建立在流感全病毒灭活疫苗的基础上，通过选择适当的裂解剂和裂解条件裂解流感病毒，去除病毒核酸和大分子蛋白，保留抗原有效成分HA和NA以及部分M蛋白和NP蛋白，经过不同的生产工艺去除裂解剂和纯化有效抗原成分制备而成。目前使用的裂解剂主要包括如：乙醚、3－N－丁基磷酸盐（Tri－N－butyl phosphate）、聚山梨酸酯 80（Polysothat 80）、脱氧胆酸钠（ Sodium deoxyholate）及三硝基甲苯 XI00（TritoX100）等，裂解型流感疫苗可降低全病毒灭活疫苗的接种副反应，并保持相对较高的免疫原性，可扩大疫苗的使用范围，但在制备过程中须添加和去除裂解剂。
l.3亚单位型流感灭活疫苗：20世纪70和80年代，在裂解疫苗的基础上，又研制出了毒粒亚单位和表面抗原（HA和NA）疫苗。通过选择合适的裂解剂和裂解条件，将流感病毒膜蛋白HA和NA裂解下来，选用适当的纯化方法得到纯化的HA和NA蛋白。亚单位型流感疫苗具有很纯的抗原组分。英国在临床疫苗试用中，证实了免疫效果与裂解疫苗相同，并可用于儿童。1980年英国首次批准使用，而后扩展到其它国家。
多年的临床应用表明流感灭活疫苗具有很好的免疫效果和临床安全性，接种人体后可刺激机体产生相应的哪抗体，但是不能刺激产生分泌型免疫球蛋白（sIgA），这是灭活疫苗共有的缺点。此外，制备流感灭活疫苗必须使用特殊的无茵鸡胚，并且新流行的抗原变异株必须能在鸡胚中高效复制，才有可能生产大量流感病毒制备疫苗。随着制备疫苗所用的野生型病毒在鸡蛋中生长，其免疫原性在一定程度上被改变或降低。流感灭活疫苗接种途径均为皮下接种，对同型病毒感染有效，对异型病毒感染效果较差。
    2．研制中的流感疫苗
目前正在研制的流感疫苗主要有减毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、通用疫苗等类型。
2．l减毒活疫苗：减毒活疫苗由于保留了病毒原有的部分活性，可以通过自然途径感染机体并在体内复制，激发机体产生长期而有效的免疫应答。该疫苗可包含HA基因、NA基因，以及甲型或乙型流感病毒其它RNA片段的减毒基因。减毒活疫苗可以通过鼻腔免疫，和灭活疫苗相比，其诱导持续时间较长并有交叉保护性兔疫，再受到病毒感染时危害性明显降低。
由于流感病毒RNA分节段，可利用生物重组技术获得基因重配的减毒活疫苗株。最常见的冷适应型减毒活疫苗是用冷适应的供体毒株基因和当前流行的野生型毒株的其它基因重配制备的，通过在低温下连续传代使流感病毒的毒力下降。Parkin等人用定点突变和反向遗传学的方法，对野生型流感病寨的某因进行不连续突变．来达到减毒目的。
流感病毒减毒活疫苗从问世以来，已有50余年的历史，至今仍处于研制阶段。因疫苗效果严重受人群免疫状态的制约，有的疫苗株在成年人群中效果很好，但在儿童引起发烧等不良反应。有的对儿童效果很好，而对成人无效。同时重配的疫苗株的基因常不稳定，易出现返祖。
2.2基因工程疫苗：随着科学技术的发展，特别是分子生物学技术的进步，使人们可在分子水平对流感病毒进行研究。目前正在研究的流感病毒基固工程疫苗主要有基固工程活疫苗和基因工程亚单位疫苗。
2.2.1 基因工程活疫苗：基因工程活疫苗可分为基因缺失疫苗和载体疫苗两类。前者是利用基因工程方法删除与毒力有关的基因；后者是将保护性抗原基因连接到相关载体上使之表达。
基因缺失疫苗是在流感病毒CM水平上使毒力相关基因缺失，病毒虽可形成假性病毒颗粒，具有有效抗原结构，但不能重新获得毒力进一步复制繁殖。载体疫苗是将编码流感病毒相关抗原如HA和 NA基因插人到一种合适的载体中，目的抗原随载体的复制得以表达，刺檄机体产生保护性抗体。用作载体的可以是病毒：痘病毒、腺病毒等，也可以是细菌：沙门氏菌、大肠杆菌等。
2.2.2  基因工程亚单位疫苗：基因工程亚单位疫苗是利用酵母或哺乳动物的表达系统表达流感病毒保护性抗原蛋白，如HA、NA、M2等蛋白，产物纯化后可用来兔疫机体，产生保护性抗体，预防流感。
HA基因工程疫苗是目前研究最多的基因工程疫苗，用重组技术克隆HA基因，在真核细胞中表达HA蛋白，纯化后既可用作亚单位疫苗成份。HA具有很强的抗原表位，可刺激机体产生保护性免疫应答。NA特异性抗体可抵抗病毒的感染、减少病毒复制、阻断病毒传播，而正常的流感病毒中NA蛋白所占比例较小，因此使用基因工程方法可大量生产疫苗用NA蛋白。
2．3核酸疫苗：20世纪80年代人们首次发现小鼠肌肉细胞可摄取裸DNA，并可表达相应的蛋白产物，由此引发核酸疫苗的研究。核酸疫苗是使用DNA重组技术将编码一种免疫原基因的的核酸克隆人表达载体，该载体在细菌中扩增，质粒DNA纯化后直接接种于待免疫动物，在细胞中表达目的蛋白，引起机体的兔疫应答。
目前流感核酸疫苗的目的基因主要针对NP蛋白和HA。把HA DNA和NA DNA混合在一起免疫小鼠，小鼠不但能在致死量流感病毒感染下存活，而且病毒感染 3 d后小鼠肺中几乎不存在病毒。影响核酸疫苗发挥作用的因素主要有：抗原的细胞生物学特性、表达水平和毒性大小；宿主的基因型和年龄；DNA的接种量；接种的方法（基因枪还是肌注）。
核酸疫苗对保护动物抵御流感病毒的感染是一种既经济又有效的方法，但因研究时间短，对人的安全性还需长期周密的观察、研究和评估。
2．4通用疫苗：目前应用的流感疫苗的有效率在60％－85％之间，其主要抗原成份为流感病毒膜蛋白HA和NA。而由于流感病毒为RNA病毒，其变异率为10－5－10－3之间，这导致流感疫苗病毒株每年都需更换，为流感疫苗的制备带来不便。M2蛋白和NP蛋白在甲型流感病毒的不同亚型中高度保守，M2蛋白较小，含有97个氨基酸，从1933年首次分离到甲型流感病毒以来，M2蛋白的基因序列就没有发生变化。而近来的研究表明，将流感病毒 A/Ann/Arbor/6/60的M2蛋白通过杆状病毒载体在sf9细胞中表达，表达产物经腹腔注射BALB/c小鼠，死亡比例、两次免疫保护效应、体重等指标均表明以M2位成分的流感疫苗可以保护小鼠兔受同型或异型甲型流感病毒的致死攻击。这就为我们提供了一个思路：用M2蛋白和NP蛋白作为疫苗成份可预防所有甲型流感病毒。
    3．其它
3.1 反基因工程疫苗：反基因操作技术的基本原理为：编码一个流感病毒节段的DNA质粒转录成负链的RNA，RNA与流感毒粒PB1，PB2，PA和NP一起孵育形成RNP复合物，RNP转染人流感病毒（helper virus）预先感染的细胞，采用适当的方法分离出带有转染节段的病毒，即转染子。
这种转染子能在组织细胞培养和鸡胚中生长，同时证实在小鼠中是减毒的。Maria等人用反基因技术将毫元相关的外源基因插入A／WSN／33 （H1N1）病毒NA基因上，分离出其NA基因含有外源基因的转染子FL79，小鼠试验证实FL79是减毒的。上述结果指出，有可能利用反基因操作技术使流感病毒快速减毒，应用于疫苗生产。
3.2 佐剂疫苗：目前最常见的人用疫苗佐剂虽然仍是氢氧化铝和磷酸铝，但近年未，着眼于这两个方面的问题，人用疫苗佐剂的设计、研制和开发研究也取得了许多进展。流感佐剂疫苗的研究可提高流感疫苗的免疫成功率，并可改变目前流感疫苗接种途径单一的缺点。正在研究中的佐剂有MF59、免疫刺激复合物（ISCOM）粘膜佐剂等。粘膜免疫具有一些优点，如可避免针剂的疼痛、减少注射局部的炎症反应、易于重复接种、模拟病原体感染途径及可诱导局部IgA的生成及各种系统性B和T细胞效应等，这使得粘膜疫苗将成为疫苗发展的新趋势。但由于绝大多数非复制抗原只是在大量和反复接种后才可引起免疫应答，而且这些应答持续时问较短，即便是自然感染，所导致的免疫力持续时问也短于全身性感染，故粘膜佐剂的研究就显得格外重要。
3.3 微毒粒疫苗（virosome）：被日本人称为新的流感病毒疫苗的 virosome vaccine，也可称之为MDP－virosom vaccine。实际上是利用佐剂来提高免疫效果。他们应用B30－MDP[6－0－（2-14烷基“2－tetradecylhexadecanoyl”）－N－乙酚胞壁酰－L－丙胺酞－D－异谷氨酞]和纯化的流感病毒HA和NA，胆固醇及去
污剂（辛基苷－Octylglucoside）相混，通过超声波使之分混合、溶解，然后经纤维素柱去除去污剂。这样就能使流感病毒HA和NA亚单位内部和外表面相互附着成微脂粒的薄片状结构，其直径约为100mm，类似于完整的流感病毒颗粒，称之为微毒粒。这种疫苗在动物实验中能引起较理想的体液和细胞免疫反应。Virosome疫苗，除日本报道外，其他国家未见有公开报道，其效果仍需经实践加以验证。
    4．小结
流感是一种严重的呼吸道疾病，目前大部分使用的是抗病毒药物和灭活疫苗。新的预防制品正在研制，尤其是冷温减毒疫苗，在美国有上百万人使用，FDA已批准进入Ⅲ期临床实验，流感DNA疫苗经FDA批准进入临床实验。但仍需大量研究工作，如冷温减毒活疫苗毒力回复的可能性，DNA疫苗安全性的研究，黏膜免疫时间短等问题。我国作为流感高发国和世界流感中心，每年因流感造成大量的经济和社会损夫，并造成大量的超额死亡率。禽流感在亚洲的爆发和对人感染性的增强，使人们认识到流感病毒在自然选择压力和人为选择压力下，变异速度在加快，所造成的经济和社会危害也在增大。因此加快流感疫苗的研究，提高流感疫苗的安全性和可靠性将为我国带来巨大的经济和社会效益。
来源：中国生物制品学杂志2004年5月第17卷第3期